法国Phaseview公司Alpha3 3D光片显微成像系统 近年来，随着生命科学研究的不断深入，研究人员逐渐意识到小范围的2D平面成像并不能完全反映组织的生物学状态，而采用传统的连续切片法又很容易导致样品扭曲变形，因此，缺乏直接的3D成像手段一直是困扰各研究者的一大难题。在这一背景下，研究人员迫切需要一种能够实现大样品块、快速扫描、深度成像、高分辨率3D动态图像输出、低光毒性的荧光显微镜。而法国Phaseview公司的Alpha3 3D光片显微成像系统则很好地满足了这些需求，借助Alpha3系统，发育学家可以观察到动物模型各个阶段的组织状态，神经学家能够轻松的研究神经元的再生能力并探究新的神经传导途径，肿瘤学家可以准确的筛选血管抑制剂类药物，免疫学家能够研究淋巴系统整体的发育过程。Alpha3除了可以观察透明化的样品外，还可以实现动物的在体成像。对于表达内源性荧光蛋白或者标记了荧光抗体的组织也可以快速便捷地成像。 从原理上来讲，3D光片显微技术与传统的宽场显微技术或共聚焦显微技术有很大不同，后两者需要照射或扫描成像目标物中的整个样本，而光片显微镜只需要用薄层光（实际上为2D）从侧边照射样本。随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号，检测方向与薄层光线的照射方向相垂直。因此，该技术的光学层析能力（optical sectioning，即z层面上样本结构的分辨能力）不像共聚焦成像技术那样取决于焦点处光子的采集，而是来自于在最开始时每次仅激发一个层面上的荧光基团。换言之，光片显微技术只会激发一个焦平面上或旁边的分子，因此大大降低了光毒性，并且提高了长时间对活体样本进行成像的能力。基于3D光片荧光显微镜本身的技术特点，该系统极大程度上满足了快速、大体积3D成像、高信噪比及长时间成像的需要。 简而言之，光片荧光显微技术能够以很高的三维分辨率对生物样本进行长时间的、较为温和的3D成像。特别是当该技术与高速照相机相结合时，就能够快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。由于光片荧光显微技术能够快速地对生物样本进行较为温和的容积成像，因此，Nature Mehtods将该技术评选为2014年年度技术。 主要优势： 大尺寸3D样本成像，样本最大体积：10mm×10mm×10mm 专利的远程数字镜头技术并结合激光片层扫描系统，避免样本震动干扰，3D重构准确性高 100帧/秒的超高图像采集速度，快速记录样品每一时刻的状态 垂直于探测器的激发光片层，最大程度降低光毒性及光漂白作用 具有超高的时空分辨率 高灵活性，从在体成像到大体积透明化样本成像 宏观至微观全方位成像，能够以亚细胞分辨率对整个器官成像同时也可以对非常小的样本进行成像 兼容市面上所有的透明化溶剂 独有的通过光学目镜进行活体观察的功能 长时程在体成像时的环境（温度、CO2）控制功能 软件系统：图像捕获和3D图像处理，如体积、去卷积、3D渲染、3D延时拍摄等 通过多波段陷波滤光片实现超快多通道采集 应用领域： 1、模式动物整体3D成像：果蝇，斑马鱼，线虫等； 2、动物器官3D成像：心脏、脑、眼、耳等器官发育； 3、神经生物学研究：大脑和神经活性的3D功能成像； 4、3D高分辨率、高速实时成像：透明化样本3D成像、荧光标记的活体样本的结构特性、微弱荧光信号的高速3D成像； 5、3D细胞长时程培养实时成像； 6、免疫生物学研究：淋巴结成像，抗原抗体成像等 7、形态和发育生物学研究：胚胎成像； 8、细胞动态过程的快速成像，例如：细胞迁移、血流、血管发育、Ca2+成像 9、海洋生物荧光成像：海鞘、鱿鱼、浮游生物及扁形虫 10、植物生物学研究：观察敏感的发育过程和执行生理测量 11、药物药理毒理及药代动力学研究 技术参数： 激光光源 激光合束器可合并4束激光：连续光纤激光器/激光二极管或DPSS激光器，波长可选（375nm，405nm，445nm，488nm，532nm，561nm，638nm，730nm），输出功率25mW至250mW可选 光片 双智能照明光源，通过光纤与激光合束器连接 多向光片，可进行实时焦平面扫描 色差校正400nm-632nm 最小光片厚度2um，范围：2um-12um，宽度：2mm-15mm 样品腔&样本支架 样品腔尺寸：宽21mm，长70mm，高度25mm；体积<15mL；腔体高度抗各类腐蚀液、透明化溶剂，海水等； 样品尺寸在um到cm范围； 多种支架可用于固定不同类型样本：模具，盖玻片，玻璃支撑 可选：温度及CO2控制 量化扫描 Z轴马达驱动平台：运动范围15mm，精度0.1um，采集速度40fps 可选：用于XY方向移位的马达驱动平台（大尺寸样本时使用）：范围15mm，精度0.1um 可选：超快3D扫描模块（75帧/秒） 探测单元 荧光显微镜，由2位置物镜滑块，目镜，视频口，马达驱动滤光片轮及多陷波滤光片组成 探测物镜 多种可选的长工作距离物镜：空气物镜、浸液物镜、带校正环的透明化物镜（RI校正范围：1.33-1.56） 放大率：2×至60× 图像传感器 sCMOS：2048×2048像素，格式13mm×13mm，尺寸6.5um×6.5um，USB3.0/CameraLink接口 软件 QtSPIM软件：可进行Z轴堆栈，XY-tiling，时间延迟采集，提供可用于开放资源或商业第三方软件的原始数据及元数据输出 尺寸&重量 显微镜底板600mm（宽）×600mm（长）×750mm（高），27公斤 近年来，随着生命科学研究的不断深入，研究人员逐渐意识到小范围的2D平面成像并不能完全反映组织的生物学状态，而采用传统的连续切片法又很容易导致样品扭曲变形，因此，缺乏直接的3D成像手段一直是困扰各研究者的一大难题。在这一背景下，研究人员迫切需要一种能够实现大样品块、快速扫描、深度成像、高分辨率3D动态图像输出、低光毒性的荧光显微镜。而法国Phaseview公司的Alpha3 3D光片显微成像系统则很好地满足了这些需求，借助Alpha3系统，发育学家可以观察到动物模型各个阶段的组织状态，神经学家能够轻松的研究神经元的再生能力并探究新的神经传导途径，肿瘤学家可以准确的筛选血管抑制剂类药物，免疫学家能够研究淋巴系统整体的发育过程。Alpha3除了可以观察透明化的样品外，还可以实现动物的在体成像。对于表达内源性荧光蛋白或者标记了荧光抗体的组织也可以快速便捷地成像。 从原理上来讲，3D光片显微技术与传统的宽场显微技术或共聚焦显微技术有很大不同，后两者需要照射或扫描成像目标物中的整个样本，而光片显微镜只需要用薄层光（实际上为2D）从侧边照射样本。随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号，检测方向与薄层光线的照射方向相垂直。因此，该技术的光学层析能力（optical sectioning，即z层面上样本结构的分辨能力）不像共聚焦成像技术那样取决于焦点处光子的采集，而是来自于在最开始时每次仅激发一个层面上的荧光基团。换言之，光片显微技术只会激发一个焦平面上或旁边的分子，因此大大降低了光毒性，并且提高了长时间对活体样本进行成像的能力。基于3D光片荧光显微镜本身的技术特点，该系统极大程度上满足了快速、大体积3D成像、高信噪比及长时间成像的需要。 简而言之，光片荧光显微技术能够以很高的三维分辨率对生物样本进行长时间的、较为温和的3D成像。特别是当该技术与高速照相机相结合时，就能够快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。由于光片荧光显微技术能够快速地对生物样本进行较为温和的容积成像，因此，Nature Mehtods将该技术评选为2014年年度技术。 主要优势： 大尺寸3D样本成像，样本最大体积：10mm×10mm×10mm 专利的远程数字镜头技术并结合激光片层扫描系统，避免样本震动干扰，3D重构准确性高 100帧/秒的超高图像采集速度，快速记录样品每一时刻的状态 垂直于探测器的激发光片层，最大程度降低光毒性及光漂白作用 具有超高的时空分辨率 高灵活性，从在体成像到大体积透明化样本成像 宏观至微观全方位成像，能够以亚细胞分辨率对整个器官成像同时也可以对非常小的样本进行成像 兼容市面上所有的透明化溶剂 独有的通过光学目镜进行活体观察的功能 长时程在体成像时的环境（温度、CO2）控制功能 软件系统：图像捕获和3D图像处理，如体积、去卷积、3D渲染、3D延时拍摄等 通过多波段陷波滤光片实现超快多通道采集 应用领域： 1、模式动物整体3D成像：果蝇，斑马鱼，线虫等； 2、动物器官3D成像：心脏、脑、眼、耳等器官发育； 3、神经生物学研究：大脑和神经活性的3D功能成像； 4、3D高分辨率、高速实时成像：透明化样本3D成像、荧光标记的活体样本的结构特性、微弱荧光信号的高速3D成像； 5、3D细胞长时程培养实时成像； 6、免疫生物学研究：淋巴结成像，抗原抗体成像等 7、形态和发育生物学研究：胚胎成像； 8、细胞动态过程的快速成像，例如：细胞迁移、血流、血管发育、Ca2+成像 9、海洋生物荧光成像：海鞘、鱿鱼、浮游生物及扁形虫 10、植物生物学研究：观察敏感的发育过程和执行生理测量 11、药物药理毒理及药代动力学研究 技术参数： 激光光源 激光合束器可合并4束激光：连续光纤激光器/激光二极管或DPSS激光器，波长可选（375nm，405nm，445nm，488nm，532nm，561nm，638nm，730nm），输出功率25mW至250mW可选 光片 双智能照明光源，通过光纤与激光合束器连接 多向光片，可进行实时焦平面扫描 色差校正400nm-632nm 最小光片厚度2um，范围：2um-12um，宽度：2mm-15mm 样品腔&样本支架 样品腔尺寸：宽21mm，长70mm，高度25mm；体积<15mL；腔体高度抗各类腐蚀液、透明化溶剂，海水等； 样品尺寸在um到cm范围； 多种支架可用于固定不同类型样本：模具，盖玻片，玻璃支撑 可选：温度及CO2控制 量化扫描 Z轴马达驱动平台：运动范围15mm，精度0.1um，采集速度40fps 可选：用于XY方向移位的马达驱动平台（大尺寸样本时使用）：范围15mm，精度0.1um 可选：超快3D扫描模块（75帧/秒） 探测单元 荧光显微镜，由2位置物镜滑块，目镜，视频口，马达驱动滤光片轮及多陷波滤光片组成 探测物镜 多种可选的长工作距离物镜：空气物镜、浸液物镜、带校正环的透明化物镜（RI校正范围：1.33-1.56） 放大率：2×至60× 图像传感器 sCMOS：2048×2048像素，格式13mm×13mm，尺寸6.5um×6.5um，USB3.0/CameraLink接口 软件 QtSPIM软件：可进行Z轴堆栈，XY-tiling，时间延迟采集，提供可用于开放资源或商业第三方软件的原始数据及元数据输出 尺寸&重量 显微镜底板600mm（宽）×600mm（长）×750mm（高），27公斤